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流式細(xì)胞儀實(shí)驗(yàn)方法一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備1．標(biāo)本制備：2．zui小化非特異性結(jié)合：二、凋亡1．凋亡的檢測(cè)方法：和其它2．PI染色法3．AnnexinV法4．TUNNEL法三、細(xì)胞因子1．激活的細(xì)胞因子2．CBA四、血小板1．活化2．活化檢測(cè)3．網(wǎng)織血小板五、紅細(xì)胞1．網(wǎng)織紅細(xì)胞2．PNH3．胎兒紅細(xì)胞六、腫瘤學(xué)1．DNA細(xì)胞周期2．蛋白3．多藥耐藥4．微小殘留白血病*部分標(biāo)本處理一、流式細(xì)胞術(shù)常規(guī)檢測(cè)時(shí)的樣品制備（一）直接免疫熒光標(biāo)記法取一定量細(xì)胞（約1X106細(xì)胞／ml），在每一管中...

流式細(xì)胞儀標(biāo)本的制備流式細(xì)胞儀（FCM）是八十年代集單克隆抗體、熒光化學(xué)、激光、計(jì)算機(jī)等高技術(shù)發(fā)展起來(lái)的一種先進(jìn)儀器，已廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、生物化學(xué)、生物學(xué)、腫瘤學(xué)以及血液學(xué)等方面的研究和臨床常規(guī)工作。其中檢測(cè)人白細(xì)胞表面標(biāo)志可對(duì)白血病、淋巴瘤作用迅速正確的診斷，對(duì)淋巴細(xì)胞群和亞群進(jìn)行分類(lèi)，還能分離純化某一群或亞群細(xì)胞?；罴?xì)胞免疫熒光技術(shù)是用于FCM檢測(cè)的標(biāo)本準(zhǔn)備，染色后也能在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察，在某些實(shí)驗(yàn)條件下，活細(xì)胞免疫熒光染色后的特異性和敏感性要優(yōu)于滴片固定的常規(guī)間接免...

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡(jiǎn)稱(chēng)。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問(wèn)世以來(lái)，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。（一）原理ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除...

標(biāo)本的收集與保存臨床檢驗(yàn)常見(jiàn)的標(biāo)本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些標(biāo)本收集的時(shí)間、方法和保存都有一定的要求。一、血液標(biāo)本有些生理因素，如吸煙、進(jìn)食、運(yùn)動(dòng)、情緒波動(dòng)、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化，有些甚至還有晝夜變化。因此血液標(biāo)本的采集應(yīng)盡量避免生理因素干擾，以條件一致為宜，如無(wú)法避免，應(yīng)在標(biāo)本上注明該因素。1．外周血一般選取左手無(wú)名指內(nèi)側(cè)采血，該部位應(yīng)無(wú)凍瘡，炎癥，水腫，破損。如該部位不符合要求，以其他手指...

1、免疫檢測(cè)的基礎(chǔ)知識(shí)ELISA是一種免疫測(cè)定。免疫測(cè)定（immunoassay，IA）是應(yīng)用免疫學(xué)技術(shù)測(cè)定標(biāo)本的方法。在臨床檢驗(yàn)中主要通過(guò)抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)體液中的抗體或抗原性物質(zhì)。1.1抗原抗原是能在機(jī)體中引起特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)?？乖M(jìn)入機(jī)體后，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和引起細(xì)胞免疫。在免疫測(cè)定中，抗原是指能與抗體結(jié)合的物質(zhì)。能在機(jī)體中引起抗體產(chǎn)生的抗原多為分子量大于5000的蛋白質(zhì)。小分子化合物在與大分子蛋白質(zhì)結(jié)合后能引起機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體的，稱(chēng)為半抗原（hapten）。例如...

WesternBlot工作原理蛋白質(zhì)的電泳分離是重要的生物化學(xué)分離純化技術(shù)之一,電泳是指帶電粒子在電場(chǎng)作用下,向著與其電荷相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象.根據(jù)所采用的支持物不同,有瓊脂糖凝膠電泳,淀粉凝膠電泳,聚丙烯酰胺凝膠電泳等.其中,聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）由于無(wú)電滲作用,樣品用量少（1-100μg）,分辨率高,可檢出10-9-10-12mol的樣品,凝膠機(jī)械強(qiáng)度大,重復(fù)性好以及可以通過(guò)調(diào)節(jié)單體濃度或單體與交聯(lián)劑的比例而得到孔徑不同的凝膠等優(yōu)點(diǎn)而受到廣泛的應(yīng)用.SDS-PAG...

熒光探針Fluo-3/AM和FuraRed測(cè)量單細(xì)胞中比率鈣中國(guó)醫(yī)學(xué)物理學(xué)雜志1999年第3期第16卷實(shí)驗(yàn)研究作者：馬曉冬朱曉亮趙清張瑾張颯雷國(guó)華黃行許鮑永耀單位：馬曉冬趙清張瑾張颯雷國(guó)華黃行許鮑永耀（*軍醫(yī)大學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室）；朱曉亮（南方醫(yī)院皮膚科,廣東廣州510515）關(guān)鍵詞：激光掃描共聚焦顯微鏡；Fluo-3/AM；FuraRed；比率鈣...摘要：應(yīng)用ACAS570激光掃描共聚焦顯微鏡（laserscanningconfocalmicroscope，LSCM簡(jiǎn)稱(chēng)共焦顯微...

激光掃描共焦顯微鏡（LSCM）是八十年代問(wèn)世的一種新型分析儀器，由于其高分辨率，高靈敏度，高放大率等特點(diǎn)，在細(xì)胞水平上能作多種功能測(cè)量和分析，成為分析細(xì)胞學(xué)的重要研究工具，激光掃描共焦顯微鏡是在顯微鏡基礎(chǔ)上配置激光光源，掃描裝置，共軛聚焦裝置和檢測(cè)系統(tǒng)而形成的新型顯微鏡。它對(duì)活細(xì)胞分層掃描后得到光學(xué)切片，可進(jìn)行細(xì)胞三維重建。測(cè)量分析細(xì)胞形態(tài)學(xué)參數(shù)和熒光強(qiáng)度。利用熒光探針標(biāo)記LSCM可以對(duì)細(xì)胞內(nèi)微細(xì)結(jié)構(gòu)和離子的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行定性、定量、定時(shí)和定位分析。LSCM可以進(jìn)行顯微手術(shù)，細(xì)...

摘要：目的建立流式細(xì)胞儀測(cè)定血小板胞漿游離鈣離子濃度\[Ca2+\]i的方法。方法用Fluo3AM作為鈣指示劑，在有或無(wú)細(xì)胞外鈣\[Ca2+\]o存在的條件下，測(cè)定靜息和凝血酶激活狀態(tài)下人血小板胞漿游離鈣離子濃度\[Ca2+\]i的變化。結(jié)果Fluo3AM標(biāo)記的血小板的平均熒光強(qiáng)度明顯增加。凝血酶使負(fù)載Fluo3AM標(biāo)記的血小板胞漿\[Ca2+\]i明顯增加，且顯示劑量依賴和對(duì)\[Ca2+\]o的依賴。結(jié)論凝血酶引起血小板胞漿\[Ca2+\]i增加的來(lái)源主要是\[Ca2...

培養(yǎng)某一類(lèi)型細(xì)胞沒(méi)有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(zhǎng)?？傊?，MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)"細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)"細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)好的開(kāi)始，各種目的無(wú)血清培養(yǎng)AIMV（12005）培養(yǎng)基（SFM）。L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì)降解，但是確切的降解率一...

（一）直接免疫熒光標(biāo)記法取一定量細(xì)胞（約1X106細(xì)胞／ml），在每一管中分別加入50μl的HAB，并充分混勻，于室溫中靜置1分鐘以上（）,再直接加入連接有熒光素的抗體進(jìn)行免疫標(biāo)記反應(yīng)（如做雙標(biāo)或多標(biāo)染色，可把幾種標(biāo)記有不同熒光素的抗體同時(shí)加入），。孵育20-60分鐘后，用PBS（pH7．2—7．4）洗1-2次，加入緩沖液重懸，上機(jī)檢測(cè)。本方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，易于分析，適用于同一細(xì)胞群多參數(shù)同時(shí)測(cè)定。雖然直標(biāo)抗體試劑成本較高，但減少了間接標(biāo)記法中較強(qiáng)的非特異熒光的干擾，因...

ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。操作步驟可能原因解決辦法選擇試劑選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。加樣1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；2.手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（特別是...